急性心肌梗死血清心肌标记物(一)
急性心肌梗死血清诊断指标比较
急性心肌梗死血清诊断指标比较
临床心血管病杂志 2000年第2期第16卷 临床研究 作者：苏恩本 张寄南 卞智萍 徐晋丹 杨笛 马文珠
单位：苏恩本（南京医科大学第一附属医院心血管研究所(南京，210029)）；张寄南（南京医科大学第一附属医院心血管研究所(南京，210029)）；卞智萍（南京医科大学第一附属医院心血管研究所(南京，210029)）；徐晋丹（南京医科大学第一附属医院心血管研究所(南京，210029)）；杨笛（南京医科大学第一附属医院心血管研究所(南京，210029)）；马文珠（南京医科大学第一附属医院心血管研究所(南京，210
029)）
关键词：心肌梗死；肌酸激酶同工酶类；肌钙蛋白
摘 要：目的：建立血清磷酸肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)与心肌肌钙蛋白I(cTnI)测定的方法，并通过与CK、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)比较阐述其对急性心肌梗死(AMI)的诊断价值。方法：共观察急性心肌梗死(AMI)65例，陈旧性心肌梗死28例，稳定性心绞痛17例，阵发性室上性心动过速49例。建立CK-MB单克隆抗体吸附测定与cTnI ELISA双夹心测定的方法。同时观察血清CK-MB、cTnI、CK、AST、LDH在AMI等疾患中的变化。结果：血清CK-MB单克隆抗体吸附法与cTnI ELISA双夹心法回收率分别为97%～113%、94.6%～105.6%，标准曲线相关系数分别为0.993与0.990，分别与琼脂糖电泳法及国外实验室检测法对比结果基本一致。AMI胸痛发生后12 h内血清CK-MB的敏感性最高，12～24 h的敏感性与CK、cTnI相当，高于AST和LDH，而24 h后血清cTnI的敏感性最高；血清CK-MB与cTnI对AMI诊断的特异性和诊断有效性明显高于CK、AST、LDH。结论：血清CK-MB单克隆抗体吸附法与cTnI ELISA双夹心法的敏感性和特异性高，CK-MB与cTnI两个指标相互补充，对诊断AMI有重大的临床价值。
Comparison of serum markers for diagnosis of
acute myocardial infarction【急性心肌梗死血清心肌标记物】
SU En-ben ZHANG Ji-nan BIAN Zhi-ping XU Jin-dan YANG Di MA Wen-zhu
(The First Affiliated Hospital, Nanjing Medical University, Nanjing 210029)
Abstract：Objective: The methods of measurements of serum CK-MB and cTnI were established. Their value in diagnosis of acute myocardial infarction (AMI) was evaluated comparing to CK, AST and LDH.Method:65 cases of acute myocardine infarction (AMI),28 cases of old myocardial infarction,17 cases of stable angina pectoric and paroxysm supraventricular tachycardia were observed. Assays of CK-MB based on monoclonal antibodies against CK-MB and cTnI with a double monoclonal "sandwich" ELISA were developed. Changes of serum CK-MB, CK, AST, LDH, cTnI were detected. The values of such serum markers in diagnosis were compared each other.Result: The recovery rate of CK-MB measured with monoclonal antibodies againt CK-MB was 97%～113% while that of cTnI measured with double monoclonal "Sandwich" ELISA was 94.6%～105.6%. The correlation coefficient of standard curve was 0.993 and 0.990 respectively. The highest se【急性心肌梗死血清心肌标记物】
nsitivity of serum CK-MB was within 12 h after the onset of chest pain in AMI patients. The sensitivity of CK matched with that of cTnI during 12～24 h, but was higher than that of AST and of LDH while after 24 h. The sensitivity of serum cTnI was the highest.Conclusion:The methods of measurements of serum CK-MB and cTnI established by monoclonal antibodies had high sensitivity and specificity. Both CK-MB and cTnI in serum would be good markers for diagnosis of AMI.
Key words：Myocardial infarction Creatine kinase isoenzymes Troponin T
磷酸肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)是诊断急性心肌梗死(AMI)和众多心肌损伤的经典指标。血清心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)能高特异性地检测心肌细胞损伤，在国内也已初步应用并受到重视〔1〕。国内仍在广泛使用的磷酸肌酸激酶(CK)、谷草转氨酶(AST)与乳酸脱氢酶(LDH)是传统的心肌酶谱指标，有不少缺陷。我们同时观察了血清CK-MB、cTnI、CK、AST与LDH在AMI、陈旧性心肌梗死(OMI)、稳定型心绞痛(SAP)及室上性心动过速患者中的动态变化，比较上述指标对AMI的诊断价值。 1 对象与方法 1.1 研究对象
随机收集1996年2月～1998年4月在我院诊治的AMI 65例(Ⅰ组)，男53例，女12例，年龄42～89岁；OMI 28例(Ⅱ组)，男20例，女8例，年龄45～85岁；SAP 17例(Ⅲ组)，男10例，女7例，年龄41～72岁；阵发性室上性心动过速49例(Ⅳ组)，男29例，女20例，年龄14～67岁。 1.2 测定方法
AMI患者采样方法为12 h内每3 h抽血1次，然后于24、36、48、72、96、120、168 h各抽血1次，其余患者采样1～3次，血样本3 d内同时测定血清CK-MB、cTnI、CK、AST与LDH。
1.2.1 血清CK-MB活性测定：用CK-MB单克隆抗体(美国圣路易华盛顿大学Ladenson教授赠送)包被乳胶小球(D=0.64 cm)，5 μg/只，1%牛血清白蛋白阻断后加0.02%叠氮钠，4℃保存备用。取待测血清100 μl，放置包被的乳胶小球1只，37℃下反应30 min，特异地吸附血清中的CK-MB。取出乳胶小球清洗后与CK基质反应，37℃下轻摇30 min，通过测定反应生成的还原型辅酶Ⅱ (NADPH)在波长340 nm的吸光度，以标准CK-MB(本室按Grase方法提纯获得)为对照计算待测血清中的CK-MB活性值。本院献血员、部分学生72例，男30例，女42例，平均年龄26.6岁，95%可信限及偏值分析获参照值范围为血清CK-MB＜10 u/L，血清CK-MB＞10 u/L为阳性。
1.2.2 血清cTnI定量测定：改良Boder等夹心ELISA法〔2〕，用抗人心肌cTnI单克隆抗体2B 1.9为第一抗体包被96孔酶联板，加待测血清后再用生物素标记的2F 6.6为第二抗体，形成双夹心，用碱性磷酸酶系统显色，波长405 nm阅读，每次检测均置标准抗原人cTnI 0～100 ng/ml不同浓度作定量参照，阳性和阴性标准进行质控。抗人心肌cTnI单克隆抗体(Ladenson教授赠送)专用于研究，与CK-MB一样获参照值范围为＜7 μg/L，血清cTnI＞7 μg/L为阳性。
1.2.3 CK、AST、LDH测定：本院检验科自动生化仪Olympus AU 800型测定。参照值范围为CK＜110 u/L，AST＜45 u/L，LDH＜240 u/L。 1.3 统计学处理 数据以 2 结果
2.1 CK-MB单克隆抗体吸附法有关参数
加入CK-MB标准品5、25、50、75、100、125 u/L得标准曲线相关系数(r)=0.993。在1份CK-MB为21 u/L的血清标本中，分别加入12.5 u/L和50 u/L的CK-MB标准，测得CK-MB的回收率分别为97%与113%。加入CK-MM 6 700 u/L、CK-BB 7 500 u/L按上述方法测定，测得OD 340 nm读数与空白对照无显著性差异(P＞0.05)，表明CK-MB单克隆抗体与CK-MM、CK-BB无交叉反应。组内(n=10)CV为1.2%～5.3%，组间CV为13.2%～18.7%。与琼脂糖电泳法对比，60例阳性血清标本经琼脂糖电泳，均有CK-MB特异条带。稳定性：同一批包被的乳胶小球置于含0.02%叠氮钠的TBS(pH=7.2)缓冲液保存，相隔8个月的测定结果，经统计学分析无显著性差异(P＞0.05)。 2.2 cTnI ELISA测定有关参数
±s表示，两组间比较采用配对t检验。
加入cTnI抗原标准品6.25、12.5、25、50、100 ng/ml得标准曲线r=0.990。添加和回收率为94.6%～105.6%。重复试验差值小于8.7%，血清储存在-20℃状态下1个月cTnI浓度不变。用横纹肌匀浆上清代替血清反应，其cTnI为0，心肌匀浆上清(蛋白含量为17.2 g/L)稀释1万倍后其测定值为42.0 μg/L。10份标本送美国Landenson实验室用Stratus自动分析仪检测，Stratus结果比本室高，阳性与阴性两者相符。
2.3 CK-MB、cTnI、CK、AST与LDH对AMI的诊断价值
65例AMI患者血清CK-MB、CK、AST、LDH和cTnI胸痛后不同时间段的敏感性比较见表1。 表1 65例AMI患者血清CK-MB、CK、AST、LDH和cTnI胸痛后不同时间段的敏感性比较 %(例/例)【急性心肌梗死血清心肌标记物】
()内为相应时间段内阳性例数/检测例数，在同一时间段内，1)与CK、AST、LDH、cTnI比，2)与AST、LDH比，3)与cTnI比，4)与LDH、cTnI比，5)与LDH比均P＜0.05 通过血清CK-MB、CK、AST、LDH和cTnI在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组患者中的阳性与阴性例数，分别计算它们诊断AMI的特异性、阳性预测值、阴性预测值和有效性，结果见表2。
表2 血清CK-MB、CK、AST、LDH和cTnI诊断AMI的特异性和预测值 %
特异性=Ⅱ+Ⅲ+Ⅳ组中阴性例数/Ⅱ+Ⅲ+Ⅳ组中总例数×100%。Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ+Ⅳ组中：阳性(或阴性)预测值=肯定阳性(阴性)例数/〔(肯定阳性(阴性)例数+假阳性(阴性)例数〕×100%，诊断有效性=(肯定阳性例数+肯定阴性例数)/(全部阳性例数+全部阴性例数)×100%3 讨论
CK-MB测定的方法多种多样，新的CK-MB单克隆抗体吸附法测定CK-MB比常规CK-MB活性测定能早1～2 h诊断AMI〔3〕，特别对胸痛发生后4～6 h的患者尤为重要，对AMI的早期准确诊断与尽早获得溶栓治疗有重要意义。
cTnI是近几年来出现的反映心肌损伤的高特异性指标，肌钙蛋白Ⅰ(TnI)分布在心肌与骨骼肌内，cTnI仅存在于心肌内，制备高特异性cTnI单克隆抗体测定cTnI能精确地反映心肌细胞损伤的程度。文献中报道cTnI在AMI胸痛发生后4～6 h开始升高，16 h达到高峰，受损心肌细胞内的cTnI有一较长的释放时间，在AMI发生5～7 d时仍能通过对血清cTnI的测定进一步明确诊断〔1〕。
本文观察65例AMI患者胸痛后血清CK-MB开始升高时间比CK、AST、LDH、cTnI早，且12 h内的敏感性超过上述其他指标；12～24 h内血清cTnI的敏感性与CK-MB、CK相当，高于AST、LDH；24 h后血清c
TnI的敏感性明显比CK-MB、CK、AST高，也稍高于LDH。血清CK-MB与cTnI对诊断AMI的特异性、阴性预测值和诊断有效性均明显高于CK、AST与LDH(均P＜0.01)。
综上所述，单克隆抗体吸附法测定血清CK-MB与ELISA双夹心法测定cTnI有很高的敏感性和特异性，且操作简便，不需特殊设备。CK-MB
和cTnI两个指标能互相补充，明显优于传统的心肌酶谱指标，目前被认为是诊断AMI实验室指标中的最佳组合〔4〕，适于国内进一步推广应用。 参考文献：
1 Geza S B,Sharon P,Yvonne L,et al.Development of monoclonal antibodies for an assay of cardiac troponin-Ⅰ and preliminary results in suspected cases of myocardial infarction.Clin Chem,1992,38:2203～2214
2 张寄南，杨国平，苏恩本，等.血清肌钙蛋白Ⅰ诊断急性心肌梗塞的研究.中华心血管病杂志，1997，25：379～382
3 Trimmis A D.Will serum enzymes and other proteins find a clinical application in the early diagnosis of myocardial infarction?Br Heart J,1994,4:309～310
4 Adams J E,Schechtman K B,Landt Y,et al.Comparable detection of acute myocardial infarction by creatine kinase MB isoenzyme and cardiac troponin I.Clin Chem,1994,40:1291～1295
http://m.zhuodaoren.com/tuijian369517/
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