国家标准酸奶中菌落数总数(一)
酸奶中乳酸菌菌落总数测定
存档日期： 存档编号：
连 云 港 师 范 高 等 专 科 学 校
毕 业 论 文（设 计）
论 文 题 目： 酸奶中乳酸菌菌落总数的测定
姓 名： 朱 九 凤
系 科： 生命科学系
专 业 、 班 级： 08生物技术及应用
指 导 教 师： 沈 洁
连云港师范高等专科学校教务处
目 录
中文摘要 ..................................................................................................... 3
ABSTRACT ................................................................................................ 3
1.引言 .......................................................................................................... 4
2.材料与方法.............................................................................................. 4
2.1实验样品 ........................................................................................ 4
2.2主要的试剂与仪器 ........................................................................ 4
2.3培养基............................................................................................. 5
2.4准备工作 ........................................................................................ 5
3．实验过程............................................................................................... 5
3.1编号 ................................................................................................. 5
3.2样品稀释 ........................................................................................ 5
3.3制作平板 ........................................................................................ 6
3.4菌落培养 ........................................................................................ 6
3.5菌落计数 ........................................................................................ 6
4.结果 .......................................................................................................... 6
4.1菌落观察结果 ................................................................................ 6
4.2菌落计数结果 ................................................................................ 6
4.3计算样液中的乳酸菌菌落数 ........................................................ 7
5.分析与讨论.............................................................................................. 8
参考文献 ..................................................................................................... 8
中文摘要
摘要: 本试验采用平板记数法，对完达山优钙酸牛奶、伊利原味酸牛奶、君乐宝原味发酵型酸牛奶3个品牌市售酸奶中乳酸菌菌落总数进行了测定。测定结果显示，完达山优钙酸牛奶、伊利原味酸牛奶、君乐宝原味发酵型酸牛奶3种市售酸奶均符合国家标准(GB2746-1999)规定的质量标准。其中，完达山优钙酸牛奶中乳酸菌菌落总数最多，平均达到298cfu/mL，最少是君乐宝原味发酵型酸奶平均达到110 cfu/mL。
关键词: 酸奶；乳酸菌；菌落总数的测定；平板记数法
ABSTRACT
Abstract: This test method to count the flat panel, WanDaShan optimal calcium yogurt, YiLi flavor to the yogurt, JunLeBao plain yogurt fermentation type three the sold yogurt active lactobacillus total colonies were determined. The determination results showed that WanDaShan optimal calcium yogurt, Yili flavor to the yogurt, jun LeBao plain yogurt fermentation type three the sold yogurt which conform to the national standard (GB2746-1999) stipulated quality standards. Among them, WanDaShan optimal calcium in the most lactic acid bacteria colonies yogurt, average was exceed 298 cfu/mL, At least a royal LeBao plain yogurt fermentation type average was exceed 110 cfu/mL.
Keywords: yogurt, lactic acid bacteria, determination of total colonies, plate counting method
酸奶中乳酸菌菌落总数的测定
1.引言
随着人们经济水平的提高及自我保健意识的增强，乳制品日益受到广大消费者的喜爱。酸奶是以灭菌乳接种乳酸菌发酵而成，比普通牛乳的营养更丰富,其蛋白质和钙更易于被人体消化吸收。酸奶还有增强消化、促进肠蠕动、增进机体的物质代谢、产生有益抗生素、抗衰老、抗肿瘤等作用[3]，这是因为酸奶中含有大量的乳酸菌。乳酸菌都对人体有益，但乳酸菌需达到一定数量，才有可能到达并定植在人体肠道内，抑制有害菌的增殖和活动，维持肠道的微生态平衡，增进人体的健康。因此，乳酸菌数量是评价乳酸菌制品质量的重要指标。
乳酸菌多数属于厌氧菌或微好氧菌,在普通培养条件下，乳酸菌菌体生长十分缓慢，甚至不能生长,这给乳酸菌的研究带来了许多不便[6]。
本试验拟采用中华人民共和国国家标准(GB4789.2—2010)中[2]规定的食品中菌落总数测定方法---平板记数法，对完达山优钙酸牛奶、伊利原味酸牛奶、君乐宝原味发酵型酸牛奶3个品牌的袋装酸牛奶中乳酸菌菌落总数进行测定，以考查市场酸奶产品的质量。
2.材料与方法
2.1实验样品
本实验以市售完达山优钙酸牛奶、伊利原味酸牛奶、君乐宝原味发酵型酸牛奶3个品牌的袋装酸奶为实验材料。材料均选自于连云港市新浦区苍梧路乐天玛特大型超市。在产品保质期内完成测定，详情情况见表1。
表1 样品编号及量取体积
样品编
号
完达山优钙酸牛奶 WDS 伊利原味酸牛奶 YL
君乐宝原味发酵型酸牛奶 JLB 样品名称
量取体积（ml） 1 1 1
2.2主要的试剂与仪器
2.2.1试剂 生理盐水配制 称取9克氯化钠，用蒸馏水溶解定容至1000 ml，备
用。
2.2.2主要设备与仪器 超净工作台（SW-CJ-1B）、手提式高压蒸气灭菌锅(上海三申医疗器械YX280A)、恒温培养箱(PYX-120)、显微镜(OLYMPUS CH20)等。
2.3培养基
在对完达山优钙酸牛奶、伊利原味酸牛奶、君乐宝原味发酵型酸牛奶3个品牌的袋装的酸牛奶进行的预实验中发现，乳酸菌不适合在普通牛肉膏蛋白胨培养基上生长；然后在老师的指导与建议下，同时根据学校实验室现有条件，最终确定本次实验采用LAB培养基（乳酸菌菌落计数用）。
2.3.1培养基的主要成份 LAB培养基的主要成份是，牛肉膏、酵母膏、乳糖、吐温80 、无水碳酸钙、无水磷酸二氢钾、琼脂、蒸馏水。
2.3.2培养基（1000ml）的配制及其灭菌 取一个白瓷缸洗干净后盛500毫升蒸馏水放于电炉上加热，水沸后加入已称量好的牛肉膏10g、酵母膏10g、乳糖20g、吐温80 1.0 ml、无水碳酸钙10g、无水磷酸二氢钾2g，用玻璃棒不停搅拌，再加入琼脂10 g，同时调低电炉温度，不停搅拌，待琼脂全部溶解均匀时调pH 值至6.6，定容至1000ml，关掉电源，分装培养基。高压蒸汽灭菌，灭菌温度121℃，灭菌时间20分钟[1]，取出备用。
2.4准备工作
将洗干净的培养皿，移液管，试管放置至彻底干燥，取适宜尺寸的干净牛皮纸分别将培养皿、移液管、试管包扎紧[4]。然后高压蒸汽灭菌，灭菌温度121℃，灭菌时间15分钟，取出备用。
3．实验过程
3.1编号
取无菌平皿3 套，用记号笔标明10-7两套，剩余一个标明CK,为空白对照。另取7支灭菌空试管，分别加入9ml灭菌生理盐水，排列于试管架上，用记号笔依次标明10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7。
3.2 样品稀释
用1ml无菌吸管精确地吸取1ml完达山优钙酸牛奶样液加入10-1的试管中，然后仍用此吸管将管内稀释液来回吸吹三次，吸时伸入管底，吹时离开液面，使
国家标准酸奶中菌落数总数(二)
国标-菌落总数测定
食品卫生微生物学检验 菌落总数测定
1 主题内容与适用范围
本标准规定了食品中菌落总数的测定方法。
本标准适用于食品中菌落总数的测定。
2 术语
菌落总数是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后(如培基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等)，所得1mL(g)检样中所含菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧的菌落总数。
菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。 3 引用标准
GB 4789.28 食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂 4 设备和材料
4.1 温箱：36±1℃。
4.2 冰箱：0～4℃。
4.3 恒温水浴：46±1℃。
4.4 天平。
4.5 电炉
4.6 吸管。
4.7 广口瓶或三角瓶：容量为500mL。
4.8 玻璃珠：直径约5mm。
4.9 平皿：直径为90mm。
4.10 试管。
4.11 放大镜。
4.12 菌落计数器。
4.13 酒精灯。
4.14 均质器或乳钵。
4.15 试管架。
4.16 灭菌刀或剪子。
4.17 灭菌镊子。
5 培养基和试剂
5.1 营养琼脂培养基：按GB 4789.28中4.7规定。
5.2 磷酸盐缓冲稀释液：按GB 4789.28中3.22规定。
5.3 生理盐水。
5.4 75%乙醇。
6 检验程序
菌落总数的检验程序如下。
（图略）
7 操作步骤
7.1 检样稀释及培养
7.1.1 以无菌操作，将检样25g(或mL)剪碎放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1∶10的均匀稀释液。
固体检样在加入稀释液后，最好置均质器中以8000～10 000r/min的速度处理1min，做成1∶10的均匀稀释液。
7.1.2 用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液)，振摇试管，混合均匀，做成1∶100的稀释液。
7.1.3 另取1mL灭菌吸管，按上条操作顺序，做10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1mL火菌吸管。
7.1.4 根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。
7.1.5 稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基(可放置于46±1℃水浴保温)注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照
7.1.6 待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h。
7.2 菌落计数方法
做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
7.3 菌落计数的报告【国家标准酸奶中菌落数总数】
7.3.1 平板菌落数的选择
选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。平皿内如有链状菌落生长时(菌落之间无明显界线)，若仅有一条链，可视为一个菌落；如果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。
7.3.2 稀释度的选择
7.3.2.1 应选择平均菌落数在30～300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之(见表中例1)。
7.3.2.2 若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2，应报告其平均数；若大于2则报告其中较小的数字(见表中例2及3)。
7.3.2.3 若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例4)。
7.3.2.4 若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例5)。
7.3.2.5 若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之(见表中例6)。
7.3.2.6 若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例7)。
7.3.3 菌落数的报告
菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示(见表中“报告方式”栏)。
稀释度选择及菌落数报告方式
（图略）
附加说明：
本标准由卫生部卫生监督司提出。
本标准由卫生部食品卫生监督检验所负责起草。
本标准主要起草人刘宏道。
本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。
国家标准酸奶中菌落数总数(三)
酸奶中乳酸菌菌落总数测定 (2)
目录
中文摘要 ......................................................... 2 英文摘要 ......................................................... 2 1.前言 ........................................................... 3 2.材料与方法 ..................................................... 3 2.1 试验材料 ................................................. 3 2.2 试剂及其配置 ............................................. 3 2.3 主要仪器 ................................................. 4 2.4 实验方法 ................................................. 4 2.4.1实验原理 ............................................. 4 2.4.2亚硝酸钠标准曲线的绘制 ............................... 4 2.4.3样品的处理 ........................................... 5 2.4.3样品中亚硝酸盐的测定 ................................. 5 3. 样品中亚硝酸钠含量的计算结果 .................................. 6 4.讨论 ........................................................... 6 参考文献 ......................................................... 7
中文摘要
摘要：本实验采用分光光度法对腐乳中的亚硝酸钠的含量进行了测定。并将测出的检测值与食品安全国家标准（GB 5009.33-2010）中关于食品中亚硝酸钠的最大残留量比较，以确定腐乳亚硝酸钠含量指标是否合格。实验结果显示，所选样品中的亚硝酸钠含量均在国家食品安全标准之内，分光光度法是使其行之有效的方法。
关键词：腐乳；亚硝酸钠含量；分光光度法；
英文摘要
Abstract: The experimental results of the fermented bean curd spectrophotometric method of sodium nitrite content was determined. And the measured assessment and the national food safety standards (GB 5009.33-2010) about the biggest residues in food central Asia sodium nitrate compared to make sure fermented bean curd sodium nitrite content if they are qualified index. Experimental results show that the selected samples of the content of sodium nitrite were in the national food safety standards, spectrophotometry is within the effective method.
Key words：Fermented bean curd, Sodium nitrite content, spectrophotometry【国家标准酸奶中菌落数总数】
腐乳中亚硝酸钠含量的测定
1.前言【国家标准酸奶中菌落数总数】
腐乳（sufu）又称豆腐乳，是我国独特的传统发酵食品，已有一千五百多年历史。它是以大豆为原料，经过浸泡、磨浆、制坯、培菌、腌坯、装坛发酵制成。腐乳是营养丰富、风味独特、滋味鲜美、价格便宜的佐餐食品，深受国内外人民喜爱，同时也引起国内外营养学者的广泛关注。然而就是这种市场前景良好、食用了近千年的发酵食品在食用安全方面也出现了问题。经研究发现腐乳中含有亚硝酸钠，而人体摄入过量的亚硝酸钠,可使血红蛋白变成高铁血红蛋白,失去输氧能力,引起肠原性青紫症,中枢神经系统缺氧而受损,呼吸困难,循环衰竭,并可造成血管扩张,血压下降。特别是亚硝酸钠被还原成亚硝酸胺后,是一个已确定的致癌物质。腐乳中亚硝酸钠含量的安全性检测势在必行。因此，本实验拟采用分光光度法对腐乳中亚硝酸钠的含量进行测定[1]。
2.材料与方法 2.1 试验材料
本实验以大家熟知的王致和牌大块腐乳系列产品以及家庭自制的腐乳为实验材料。其中王致和牌大块腐乳购自连云港市超市及周边地区的超市，家庭自制的腐乳由本人亲自制作。为更全面的检测出王致和大块腐乳中亚硝酸钠的含量，分别对瓶装的王致和大块腐乳的腐乳块和汁液中的亚硝酸钠含量进行了测定。详情见表2。
表1 实验材料的比较
样品名称 王致和腐乳汁液1 王致和腐乳块1 相同品牌不同时期的 王致和腐乳块2 家庭自制腐乳块
样品编号 WY1 WK1 WK2 ZK
生产日期 2010.5.12 2010.5.12 2009.12.28 2009.5.12
与WK1相差的天数
0 0 120 0
2.2 试剂及其配置
20g.L -1 NaOH 称取20gNaOH，溶解后定容至1L
亚硝酸钠标准溶液 精确称取0.1000 g亚硝酸钠(GR)，加水溶解后移入 500mL容量瓶中，加水定容至刻度并摇匀，再从其中取1mL，以重蒸馏水定容到100mL备用(亚硝酸盐
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