空气五氧化二磷标准曲线(一)
环境空气中五氧化二磷的测定
环境空气中五氧化二磷的测定
作者：黄英志
来源：《海峡科学》2007年第06期
【摘要】 采用水作吸收液，抗坏血酸为还原剂，测定环境空气中的五氧化二磷。结果表明，该法的相关系数r>0.999，方法检出限为0.5μg/25ml，当采气体积为60L 时，最低检出浓度为0.008 mg/m3，该方法的精密度高和准确度好，适用于空气中五氧化二磷的测定。
【关键词】 环境空气 五氧化二磷 测定
气态五氧化二磷样品的采集方法主要有过氯乙烯滤膜富集法和水溶液吸收法。前者存在过滤乙稀滤膜不易获得且价格昂贵，滤膜样品需前处理，操作较为繁琐等缺点；P2O5定量方法有两种，一种是采用抗坏血酸 [1]或氯化亚锡（SnCl2）[2]作还原剂测定，氯化亚锡作还原剂方法存在显色受温度影响大，试剂空白高的缺点；另一种是离子色谱法[3]，该方法对仪器要求高，而且方法检出限较高。目前，空气中P2O5测定的报道鲜见。本文以生产三氯化磷企业操作间室内空气监测为例，用蒸馏水做吸收液，在抗坏血酸还原体系中，测定了空气中P2O5，并对吸收条件、样品稳定性、回收率等进行研究，结果表明该法吸收效率高，稳定性好。 1 方法原理
五氧化二磷遇水生成磷酸，在酸性条件下，与钼酸铵、酒石酸锑钾反应生成磷钼杂多酸，被抗坏血酸还原为磷钼蓝，颜色深浅与P2O5含量成正比。
2 试验方法
2.1 仪器与试剂
7230分光光度计(厦门分析仪器厂)
P2O5贮备溶液：称取0.1917 g优级纯磷酸二氢钾（KH2PO4，在110℃干燥2h）溶于水，移入1L 容量瓶中。加硫酸（1+1）5 ml，用水定容,摇均。此溶液100μg·ml-1 P2O5，临用时，用水稀成10μg·ml-1 P2O5的标准溶液。
10%（w/v）抗坏血酸溶液：在约4℃可稳定数周。如颜色变黄，则弃去重配。 硫酸（1+1）
钼酸盐溶液将13% (w/v)钼酸铵（（NH4）6MO7O24·4H2O）100 ml溶液徐徐加到硫酸（1+1）300ml中，加0.35%(w/v)酒石酸锑氧钾（K（SbO）C4O6·1/2H2O）100 ml溶液并且混合均匀。贮于棕色玻璃瓶中于4℃保存，四个月不失效。
2.2 标准曲线的绘制
分别移取0、0、0.25、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 ml P2O5标准溶液到25 ml 具塞比色管中，加水定容至25 ml。再向各管中加入10%抗坏血酸溶液1 ml，混匀。30S后加2 ml钼酸盐溶液充分混匀，放置15min。用2cm比色皿,于 700nm波长处，以水作参比进行比色测定。
2.3 样品采集与测定
采用内装有25 ml 吸收液的多孔玻板吸收管，以1.0L·min-1的流量采样60min。 吸取适量样品溶液于25 ml 比色管中，加水定容至25 ml，以下步骤同标准曲线。 3 结果与讨论
3.1吸收液选择【空气五氧化二磷标准曲线】
P2O5易溶于水生成磷酸与偏磷酸，用水、0.05mol·L-1 NaOH二种吸收液，采用串联两支吸收管后，用相对比较法进行采样效率的评价，采集空气中P2O5，二种吸收液的富集效率均达99%以上。由于显色反应必须在酸性条件下完成，因此，本文选用水作吸收液，这样可以省去用NaOH作吸收液，显色时调节溶液酸度的繁琐过程。
3.2 显色时间
室温10℃~30℃，15min后显色可达完全，显色后可稳定24h。在25℃时10μg·（25 ml）-1 P2O 5 的标样在15min到24h的测定值在0.178~0.182之间。
3.3 方法检出限
以E=0.01吸光度相对应的P2O5含量计算，检出限为0.5μg·（25 ml）-1，当采样体积为60L时，最低检出浓度为0.008 mg·m-3。
回归方程为：A=0.0178C+0.0005，r>0.999测定P2O5量的线性范围为2.5~60μg·（25 ml）-1。
3.4 共存离子的影响
环境空气中污染成分相当复杂，而且水对HCl、SO2、NO2、HF、H2S等也有较好的吸收性，因此针对这些可能存在的污染物，进行共存离子的影响实验。
空气五氧化二磷标准曲线(二)
工作场所空气中五氧化二磷测定方法的新改进
工作场所空气中五氧化二磷测定方法的新改进
依照GBZ-T160.30-2004标准，用钼酸铵分光光度法测定五氧化二磷，发现相关系数达不到分析测试要求，且显色不稳定，重现性差，回收率低，难以作出理想的标准曲线。通过参考其他资料，改进试剂，优化显色时间，调整波长，得到较好的效果，现将改进的方法报道如下。
1、材料与方法
1.1 仪器及试剂
空气中的磷酸雾用微孔滤膜采集，以水洗脱后，在酸性溶液中，与钼酸铵和抗坏血酸反应生成磷钼蓝，再进行比色定量。使用的仪器有微孔滤膜，孔径0.8 μm；采样夹，滤料直径为40 mm；小型塑料采样夹，滤料直径为25mm；空气采样器，流量为0-3 L/min和0-10 L/min；具塞试管(10 mL)；容量瓶(50 mL)；烧杯(100 mL)；恒温水浴箱；分光光度计。试剂有：实验用水为去离子水；硫酸：p20＝1.84g/mL；硫酸溶液为1：1；钼酸铵溶液为3%(称取30 g钼酸铵溶于1000 mL水中)；抗坏血酸；分析纯；标准溶液(准确称取0.1918 g干燥过的磷酸二氢钾溶于水中，定量转移人1000 mL容量瓶中，再稀释至刻度，此溶液为0.1 mg/mL标准贮备液，使用前用水稀释成10.0g/mL五氧化二磷标准溶液，或用国家认可的标准溶液配制)。
1.2 样品采集、运输和保存
现场采样按照GBZ 159标准执行。短时间采样：在采样点，用装有微孔滤膜的采样夹，以5 L/min流量采集15 min空气样品。长时间采样：在采样点，将装有微孔滤膜的小型塑料采样夹，以l L/min流量采集4-8 h空气样品。个体采样：在采样点，将装有微孔滤膜的小型塑料采样夹，佩戴在采样对象的前胸上部，进气口尽量接近呼吸带，以1 L/min流量采集2-8 h空气样品。采样后，将滤膜的接尘面朝里对折2次，放人具塞试管中运输和保存。样品在室温下可保存3 d。
1.3 分析步骤
1.3.1 五氧化二磷标准曲线的绘制 在6只具塞比色管中，分别加入0.00 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL、0.80 mL、1.00 mL五氧化二磷标准溶液，加入水至5.0mL，配成0.0μg、2.0μg、4.0μg、6.0μg、8.0μg、10.0μg五氧化二磷标准系列。向各标准管中准确加入0.25 mL(1：1)硫酸溶液，摇匀；加0.25 mL 3%钼酸铵溶液，混匀；加0.01g抗坏血酸，于沸水浴中加热15 min，取出冷却。于700 nm波长下测量吸光度，以吸光度均值对相应的五氧化二磷含量(μg)绘制标准曲线。
1.3.2 对照试验 将装有微孔滤膜的采样夹带至采样点，除不连接空气采样器采集空气样品外，其余操作同样品，作为样品的空白对照。
1.3.3 五氧化二磷样品的处理 向装有滤膜的具塞比色管中加入10.0 mL水，洗脱10 min。取洗脱液5.0 mL，测定方法同标准系列。若洗脱液中磷酸浓度超过测定范围，可用洗
脱液稀释后测定，计算时乘以稀释倍数。
1.3.4 样品测定 用测定标准系列的操作条件测定样品和空白对照的吸收液。测得的样品吸光度值减去空白对照吸光度值后，由标准曲线得五氧化二磷的含量(g)。
1.4 计算
将采样体积换算成标准采样体积。然后计算空气中五氧化二磷的浓度。公式：
式中c——空气中五氧化二磷的浓度(mg/m)；m——测得样品中五氧化二磷的含量(μg)；V——标准采样体积(L)。 3【空气五氧化二磷标准曲线】
2、结果与讨论
2.1 试剂配制方法改进
原方法测定显色不稳定，回归系数不好，达不到标准要求。用改进后的硫酸(1：1)、3%的钼酸铵和抗坏血酸作还原剂，测定五氧化二磷的标准曲线，相关系数好，方法简便。
2.2 波长的选择
取五氧化二磷标准溶液按实验方法操作显色，在分光光度计上于波长500-800 nm范围内扫描吸收光谱。其最大吸收波长为700 nm，故本法选择700 nm为测定波长。
2.3 显色酸度的选择
分别取含量五氧化二磷量为2.0μg，按实验方法，改变硫酸(1+1)的加入量，固定其他条件，测定吸光度，实验结果见表1。结果表明，样品和标准液中加人0.25 mL时吸光度最合理。
2.4 钼酸铵用量的选择
分别取含2.0μg五氧化二磷，按实验方法，改变3%钼酸铵用量，固定其他条件，测定吸光度，实验结果见表2。结果显示，3%钼酸铵用量为0.25 mL时吸光度最合理。
改进方法后标准曲线为Y＝0.00019+0.030X，X——五氧化二磷含量；Y——五氧化二磷的吸光值。
2.5 改进后方法的精密度及最低检出限
对2.0μg、6.0μg、8.0μg的五氧化二磷标准进行测定，每种浓度测6次吸光度。另做20次零管样测定，计算出最低检出限，结果sb＝0.002031；标准曲线斜率b＝0.030；检出限DL＝3Sb/b＝3×0.00203I/0.030＝0.20μg/mL。见表4。
结果显示改进后方法的检出限0.20μg/mL和相对标准偏差在2.12%-7.79%之间都满足比色分析的要求。
2.6 改进方法的准确度
测定样品含量的五氧化二磷本底值，将溶液分成9份，3份1组，分别加低、中、高浓度的五氧化二磷，计算回收率。结果显示，回收率符合比色要求(表5)。改进方法与原方法进行比较，结果显示，改进后的方法优于比原来方法(表6)。
工作场所空气中五氧化二磷的测定方法通过改进后显色时间短、回归系数r为0.9987，相对标准偏差为4.3%，平均回收率为96.4%，检出限为0.20μg/mL。此方法在平时测定工作场所五氧化二磷过程中值得推广
空气五氧化二磷标准曲线(三)
工作场所空气中磷酸和五氧化二磷测定方法比较
【空气五氧化二磷标准曲线】
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工作场所空气中磷酸和五氧化二磷测定方法比较
作者：章以垓
来源：《科学与财富》2013年第09期
摘要：目的：比较工作场所空气中磷酸和五氧化二磷的测定方法。方法：通过原理，样品的采集，样品的处理，样品的测定，说明等五个方面进行比较。 结论：工作场所空气中磷酸和五氧化二磷的测定方法可以合并为一个方法。
关键词：五氧化二磷 磷酸 测定方法
目前，我国工作场所空气中的磷酸和五氧化二磷的测定方法，分别是国家职业卫生标准中的推荐性标准GBZ/T 160.30-2004中的3磷酸的钼酸铵分光光度法和6五氧化二磷和三氯化磷的钼酸铵分光光度法。
本文就对这两种方法中的磷酸和五氧化二磷的测定方法进行比较。
1. 在原理上
两者都是采集空气中的样品，在酸性的条件下，与钼酸铵和还原剂反应生成磷钼蓝，在680nm波长下测量吸光度，进行定量。
2. 在样品的采集上
工作场所空气中的磷酸是用装有微孔滤膜的采样夹来采集空气样品，五氧化二磷的采集是用装有10.0mL的水的多孔玻板吸收管来采集样品。纯净的磷酸是无色晶体，熔点42.3摄氏度，为高沸点酸，在空气中容易潮解，五氧化二磷，，在常温下为固体吸水性强、并有极强的脱水性，极易潮解。因此磷酸和五氧化二磷在空气中都是以气溶胶的形式存在，而这两种采样的方法对同是以气溶胶状态存在于空气中的这两种物质又没有区分。
3. 在样品的处理上
空气中的磷酸是将采过样的滤膜从具塞试管中取出，展平滤膜，泡于水中，盖上表面皿，在沸水浴中加热10min，五氧化二磷的处理则是将吸收液倒入具塞比色管中，于沸水浴中加热15min，这两种样品的处理方法上都有在沸水浴中加热的过程，在这个过程中，采集到的五氧化二磷全部转化为磷酸，与原来所采集样品中本来存在的磷酸混合在一起，这样子所测定的结果其实都是五氧化二磷与磷酸的总和。
4. 在样品的测定上
空气五氧化二磷标准曲线(四)
HPLC测定白头翁皂苷D的油水分配系数及平衡溶解度
[摘要] 目的：测定白头翁皂苷D的油水分配系数及其在不同溶剂中的平衡溶解度。方法：采用摇瓶法与高效液相色谱法相结合测定白头翁皂苷D的油水分配系数，采用高效液相色谱法测定白头翁皂苷D在6种有机溶剂及不同pH缓冲液中的平衡溶解度。结果：白头翁皂苷D在不同pH条件下油水分配系数大于零，随着pH升高白头翁皂苷D的平衡溶解度逐渐增加，在不同溶剂中白头翁皂苷D的平衡溶解度以甲醇最大（达到255.89 g・L-1），乙腈中最小（0.20 g・L-1）。结论：在胃肠生理条件下，白头翁皂苷D以分子状态形式存在，由lgPapp可知其吸收性较好，但水溶性较差，提示增加白头翁皂苷D的溶解度可能有利于提高其生物利用度。 [关键词]HPLC；白头翁皂苷D；油水分配系数；平衡溶解度
药物的亲脂性或疏水性影响着药物在细胞膜的渗透性，油水分配系数和平衡溶解度是反映药物脂溶性的2个不可或缺的重要理化参数，这2个重要理化参数对研究药物的体内过程和指导临床用药具有重要的意义[1-3]。白头翁皂苷D[4] （Pulsatilla saponin D，PSD）是从白头翁中分离出来的一种常春藤皂苷，对HL-60肿瘤细胞和LLC肿瘤细胞具有很强的抑制作用[5-6]，笔者前期研究亦发现其对人肝癌细胞SMMC-7721、人结直肠腺癌细胞HCT116等肿瘤细胞具有较强的活性，说明白头翁皂苷D具有成药性的可能。由于白头翁皂苷D的平衡溶解度和表观油水分配系数未见相关报道，同时，为了进一步开展白头翁皂苷D体内吸收过程及剂型研究，本文通过对白头翁皂苷D平衡溶解度和表观油水分配系数的测定以期为白头翁皂苷D剂型合理选择及药动学研究提供参考。
1材料
白头翁皂苷D对照品（中药固体制剂制造技术国家工程研究中心对照品室提供，经MS，NMR鉴定、HPLC测定，纯度在99%以上）；甲醇（上海振兴化工一厂，色谱纯）；磷酸二氢钠（汕头市西陇化工厂有限公司）；正辛醇（汕头市西陇化工厂有限公司，分析纯）；其他试剂均为分析纯。
高效液相色谱仪：Agilent 1260色谱泵，二级管阵列检测器（DAD），美国安捷伦科技公司；KQ-4000B型超声清洗机（巩义市予华仪器有限责任公司）；AL204电子天平[梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司]；TDL-40B飞鸽牌台式离心机（上海安亭科学仪器厂制造）；HH-2数显恒温水浴锅（常州国华电器有限公司）；SHZ-82气浴恒温振荡器（常州国华电器有限公司）；Millipore Synergy 超纯水系统（美国密理博公司）。
2方法与结果
2.1样品的制备
2.1.1 正辛醇水饱和液的制备 精密吸取200 mL正辛醇至500 mL具塞锥形瓶，加水200 mL，置磁力搅拌器上，搅拌24 h，静置，备用。
2.1.2 不同pH缓冲液的制备 按《中国药典》（2010年版二部）附录ⅩⅤD缓冲液的配制方法，分别配制pH为2.0，5.0，5.8，6.8，7.0，7.6的磷酸盐缓冲液[7]。另称取氯化钠2 g、量取浓盐酸7 mL至1 000 mL量瓶中，加水稀释至刻度配成pH 1.2的缓冲液。
2.1.3 对照品溶液的制备 精密称取白头翁皂苷D对照品（五氧化二磷减压干燥24 h）13.6 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，配制成0.544 g・L-1的对照品溶液。
2.2白头翁皂苷D的含量测定
2.2.1 检测波长的选择 取白头翁皂苷D对照品溶液，以甲醇为空白样品，采用紫外分光光度法在190～400 nm进行全波长扫描，白头翁皂苷D在203 nm处有最大吸收，因此选择203 nm作为白头翁皂苷D的检测波长。
2.2.2 色谱条件与系统适用性试验 Agilent 1260，大连依利特Hyperisil ODS2 C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相甲醇-水-甲酸 （75∶25∶0.1），流速1.0 mL・min-1，柱温30 ℃，紫外检测波长203 nm。理论塔板数按白头翁皂苷D计算不低于3 000，分离度大于1.5，色谱图见图1。
2.2.3 线性关系考察 取白头翁皂苷D对照品溶液液（0.523 g・L-1），分别进样1，2，5，10，15，20 μL。按2.2.2项下色谱条件进行测定，分别记录白头翁皂苷D的峰面积。以进样浓度（Y）为横坐标，峰面积（X）为纵坐标作图并进行线性回归，得线性方程Y=3 320.1X-8.914 6，r=0.999 9（n=6），结果表明白头翁皂苷D进样质量浓度在0.052 3～1.046 0 g・L-1呈良好线性关系。
2.2.4 精密度试验 精密吸取白头翁皂苷D对照品溶液，按上述色谱条件连续进样6次，每次进样10 μL分别记录峰面积，结果RSD 1.6%，说明该方法精密度良好。
2.2.5 稳定性试验 取已知不同表观油水分配系数及不同溶剂下的供试品溶液，分别在0，1，2，6，12，24 h条件下取样，按上述色谱条件进样10 μL进行检测并记录峰面积，结果RSD均小于2%，表明所有供试品溶液在24 h内基本稳定。
2.3白头翁皂苷D表观油水分配系数的测定
精密称取白头翁皂苷D样品0.026 4 g，置50 mL水饱和的正辛醇溶液，超声溶解，离心15 min（4 000 r・min-1），备用。精密吸取含白头翁皂苷D的水饱和正辛醇2 mL，置10 mL具塞塑料管中，分别加入2 mL正辛醇饱和水及不同pH的磷酸盐缓冲液，将具塞塑料管放入恒温振荡器中，控制温度（25±1） ℃，振摇72 h直至平衡，4 000 r・min-1离心10 min，取上层正辛醇溶液，按照上述色谱条件进样10 μL进行测定，记录峰面积。分别计算其浓度，并按下式计算表观油水分配系数。Papp=（CV-CwVw）/ CwVw ，式中Papp为白头翁皂苷D的表观油水分配系数；C为正辛醇中白头翁皂苷D的初始浓度，V为水饱和正辛醇的体积（即2.0 mL）；Cw为分配平衡时白头翁皂苷D在水相中测得的浓度，Vw为水相体积（即2.0 mL）。按照公式计算不同pH磷酸盐缓冲溶液中表观正辛醇/缓冲溶液分配系数，结果见表1。 结果显示，pH在1.2，5.0，6.0，6.8，7.0，7.6时，其lgPapp均大于零，可以预测在此pH条件下该化合物亲脂性较强，当pH为6.8时其Papp为7.48，lgPapp=0.87，说明在此pH条件下有利于吸收。
2.4白头翁皂苷D溶解度的测定
取过量白头翁皂苷D于10 mL具塞试管中，分别加以下2组介质5 mL：①有机溶剂组，包括乙醇、甲醇、乙腈、丙酮、正丁醇、二氯甲烷；②缓冲溶液组，pH分别为1.2，2.0，4.0，5.8，6.8，7.6，于25 ℃空气振荡器中振摇，分别在不同时间点取样，1万 r・min-1离心15 min后，根据线性范围采用甲醇对样品进行适当稀释，按上述色谱条件进样10 μL，记录峰面积，计算白头翁皂苷D在各介质中的含量，并计算其在不同介质中的平衡溶解度。结果见图2，3。
由图2可知，白头翁皂苷D在不同pH缓冲溶液中随着pH不断升高，溶解度逐渐增加，当pH为7.6时，其平衡溶解度达到0.38 g・L-1；由图3可知，白头翁皂苷D在不同介质中的平衡溶解度以甲醇为最大，达到255.89 g・L-1，在乙腈中最小仅为0.20 g・L-1。
3讨论
根据白头翁皂苷D的分子结构可知，白头翁皂苷D在碱性条件下易形成盐，会改变其溶解性，从而导致测定结果不准确，故选择在不同消化道的生理 pH 条件下测定其表观溶解度及油水分配系数。
油水分配系数测定的方法有摇瓶法、产生柱法以及高效液相色谱法[8-13]。由于产生柱法测定过程繁杂、平衡时间太长，反相高效液相色谱法需采用已知P值的同系物对照品来建立标准曲线，费用高，而经典的摇瓶法操作简单、成本低[14]，所以采用摇瓶法测定白头翁皂苷D的油水分配系数。此外，因白头翁皂苷D的分子结构中具有五环三萜类的母核使其具有较高的脂溶性，而分子中又含有1个由3个单糖组成的糖链和母核上连结的羧基又使其具有一定的水溶性，故在油水分配体系的选择过程中，应选择更接近生物相、极性和溶解性均较好的正辛醇为油相[15]。所以，本实验选用正辛醇-水系统作为其最佳油水分配体系。
在测定白头翁皂苷D的平衡溶解度过程中，本实验主要根据不同时间点样品浓度变化和试管壁上附着过量的白头翁皂苷D为指标，确定白头翁皂苷D是否达到平衡。由白头翁皂苷D在不同介质中的平衡溶解度可知，白头翁皂苷D溶解性较差，难以有效地被机体吸收，从而导致其生物利度较差。白头翁皂苷D在不同缓冲盐溶液中随pH升高其溶解度不断增加，这可能与其结构上含有羧基有关，白头翁皂苷D在碱性条件下易形成盐，并随着碱盐增加其溶解度升高，故可以考虑通过让其形成盐提高溶解度，从而提高生物利用度。
根据本实验对白头翁皂苷D平衡溶解度及油水分配系数的测定结果可知其水溶性较差，根据文献，药物lgPapp在-1～1时药物吸收较好[16]，该结果说明机体对白头翁皂苷D的吸收性较好。按照BCS（biopharmaceutics classification system）分类可知，白头翁皂苷D属于低溶解度、高透过性的药物，所以，研制白头翁皂苷D口服制剂的关键在于增加药物在体内的溶出度，进而有利于提高其生物利用度。
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